玉米漿和糖蜜生物素含量測定

    由于谷氨基酸是生物素缺陷性，故在一定條件下，生物素濃度高低與谷氨酸生長菌的生長量呈線性關系。利用該特性，測定玉米漿和糖蜜中生物素含量，為車間生產(chǎn)提供指導。
    谷氨酸發(fā)酵生產(chǎn)中，玉米漿和糖蜜作為主要有機氨源和生物素的來源，是非常重要的源材料。因源料來源及處理方法不同而造成每批玉米漿及糖蜜的生物素含量不穩(wěn)定，從而對谷氨酸發(fā)酵產(chǎn)酸，糖酸轉(zhuǎn)化率等造成重大影響，因此如何準確地測定二者生物素含量至關重要。由于谷氨酸菌種是生物素缺陷型，故在一定條件下，生物素濃度的高低與谷氨酸生產(chǎn)菌的生產(chǎn)量呈線性關系。因此，采用微生物法，測定玉米漿及糖蜜的生物素含量，從而為大罐發(fā)酵生產(chǎn)提供指導。

1.材料和方法
1.1菌種
　　谷氨酸生產(chǎn)菌
1.2一級種子培養(yǎng)基
　　葡萄糖2.5%，玉米漿2.6%，磷酸銨二鉀0.12%，硫酸鎂0.06%，尿素0.55%，PH7.0.
1.3生物鑒定用菌的培養(yǎng)基配方
　　分析葡萄糖14.5%硫酸鎂0.065%，磷酸銨二鉀0.16%氯化鉀0.03%，硫酸亞鐵，硫酸錳個0.0002%，PH7.0（自然PH），在0.1Mpa壓力下滅菌15min，備用。
1.4 標準生物素溶液的配置
　　精確稱取10Mg試劑生物素，定容500ml，在吸取1ml上訴稀釋液，定容到500ml,得到0.04μg/ml標準樣，在0.1Mpa壓強下滅菌15min后備用。
1.5標準曲線的繪制
　　取500ml無菌三角瓶，按表1分別不同量的鑒定用培養(yǎng)基溶液，各加不同量的生物素標準樣品，已消20%尿素及菌液。于32℃±1℃搖床培養(yǎng)12h，下?lián)u床后搖勻，用581-s型光電比色計，以650nm濾光板測定光密度（OD）。以樣品OD于空白OD之差為縱軸，以生物素含量為橫軸，畫出標準曲線。

    1.6樣品中生物素含量的測定
　　取滅菌后的500ml三角瓶，加入18ml鑒定用培養(yǎng)基，0.1ml蒸餾水。0.5ml（20%）尿素和0.4ml一級種子，在加上1ml帶測定樣品（已稀釋并滅菌），其他操作同上，漿樣品測得的OD值去空白的OD值，即得實測得OD值。樣品的稀釋倍數(shù)，依生物素含量的多少而異。一般應控制在含10μg/L一下為宜。
結(jié)果計算：
　　樣品OD值-空白OD值=實測OD值，根據(jù)回歸函數(shù)計算X值，將X值*稀釋倍數(shù)即得出樣品生物素含量（μg/L）。
    結(jié)果與討論

　　根據(jù)表2作標準曲線，如圖1.對結(jié)果進行線性回歸，得到回歸函數(shù)：Y=0.0154X+0.005R²=0.9972
　　待測玉米漿樣：V_H(X)=8.12×100=812μg/kg
　　待測甘蔗糖蜜樣：V_H(X))=7.47×500=3735μg/kg

　　我們將實驗結(jié)果用來指導發(fā)酵生產(chǎn)，取得了良好的效果。車間在更換玉米漿和糖蜜批次時，發(fā)酵培養(yǎng)基配方調(diào)整及時準備。（本文搜集整理于網(wǎng)絡，如有侵權(quán)之處，請聯(lián)系我們刪除。）